补肾活血法对去卵巢大鼠骨组织中TGF-β1、Smad2、Smad4信号传导通路的研究

【摘要】目的基于“肾藏精，主骨生髓”的理论，研究补肾活血法对绝经后骨质疏松症（PMOP）大鼠骨组织中TGF-β/Smads信号转导通路的调节作用，探讨强骨康疏方防治PMOP的作用机制。方法（1）通过整理文献资料，归纳总结补肾活血法运用于原发性骨质疏松症治疗的理论基础。（2）选用60只4.5月龄SD大鼠，随机分为正常对照组、模型空白组、中药高剂量组、中药中剂量及中药低剂量组和雌激素组。采用去大鼠双侧卵巢的方法复制骨质疏松症模型。各组大鼠在造模1个月后开始灌胃，雌激素组：戊酸雌二醇1mg/kg/d，中药高剂量组：强骨康疏方28g/kg/d（以生药计算，下同），中药中剂量组：强骨康疏方14g/kg/d，中药低剂量组：强骨康疏方7g/kg/d，正常对照组以及模型空白组灌服生理盐水。（3）灌胃45天后，末次给药24小时后，眶动静脉取血处死大鼠，采得血液并分离血清，检测肝肾功能、雌二醇；取双侧股骨，检测各组股骨骨密度值。制作骨骼病理切片，显微镜观察股骨骨小梁的细微结构变化。采用免疫组织化学染色方法检测股骨TGF-β1、Smad2、Smad4蛋白的表达。（4）数据由SPSS软件统计，采用单因素方差分析（ANOVA）进行组间两两比较，以均数标准差（—X—土s）表示。结果（1）骨密度检测结果：正常对照组与模型空白组相比存在显著差异（P＜0.01），说明造模成功；与模型空白组比较，中药低剂量组及雌激素组大鼠股骨骨密度升高（P＜0.05）；其中，中药中剂量显著升高（P＜0.01），而各用药组之间无统计学意义（P＞0.05）。（2）骨组织形态学检测：模型空白组骨小梁稀疏、断裂、穿孔，数目减少，骨髓腔扩大，骨皮质变薄。雌激素组、中药低剂量组、中药中剂量组与模型空白组相比，骨小梁宽度增加，排列整齐，连续性较好，断端减少，骨小梁间距减小、骨皮质较厚。（3）大鼠去卵巢后股骨TGF-β1表达的免疫组化:正常对照组TGF-β1主要表达于骨小梁周围的成骨细胞、骨基质,模型空白组表达部位相同，但成骨细胞染色程度明显下降。模型空白组大鼠股骨TGF-β1蛋白平均光密度值较正常对照组、雌激素组、中药低、中药中剂量组相比皆下降（P<0.05）,各用药组之间无明显差异（P>0.05）。（4）骨组织中Smad2、Smad4免疫组化：模型空白组成骨细胞阳性染色细胞数目减少，染色程度减弱。中药低、中剂量组及雌激素组，成骨细胞阳性染色细胞数量显著增加。（5）雌二醇检测结果：正常对照组大鼠与模型空白组相比，血清E2明显下降（P＜0.01）；灌服强骨康疏方各剂量后，E2水平升高（P＜0.05），中药中、小剂量及雌激素组之间无显著性差异（P＞0.05）。（6）肝肾功能检测：与正常对照相比，各治疗组及雌激素组无明显统计学意义（P＞0.05）。结论大鼠去卵巢后股骨骨密度降低，雌二醇水平下降，骨小梁数量减少，结构明显破坏，能较客观的反应绝经后骨质疏松症模型。正常大鼠骨组织可以在蛋白水平表达TGF-β1及其信号转导分子Smad2、Smad4,表明正常骨组织存在TGF-β/Smads信号转导途径，此通路异常可能是PMOP的重要机制之一。补肾活血中药强骨康疏方对去卵巢骨质疏松症大鼠有一定的治疗效果，它可能是通过提高体内雌二醇水平，干预TGF-β/Smads信号转导通路有关，并且对肝肾功能无明显的影响，副作用少，为其在临床上广泛使用奠定了基础。
【作者】赵小丹；
【导师】向阳；
【作者基本信息】湖北民族学院，中医基础理论，2014，硕士
【关键词】补肾活血；去卵巢大鼠；绝经后骨质疏松症；信号传导通路；

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